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PCR扩增仪标准操作规程 

2013-01-11 08:07 科学实验中心  科学实验中心 审核人:

1.目的:规范PCR扩增仪的使用。

2.背景知识:依据仪器使用说明和工作人员经验结合编制。

3.原理:PCR仪的作用是进行基因扩增,PCR仪简单的讲,就是一个温控设备和一个检测设备。PCR技术类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至 93℃ 左右一定时间后,使模板 DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应做准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至 55℃ 左右,引物与模板 DNA单链的互补序列配对结合;③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。2~3小时就能将待的扩目的基因扩增放大几百万倍。

4.规程

4.1系统组成:半导体技术,进口核心件,样品台容量48孔。

4.2准备:RT时先开机预热,配制PCR反应体系。

4.3实验室环境:实验室温度应保持在10℃-35℃之间,湿度应保持在45%-70%之间。

4.4开机:打开后面电源开关,仪器自检。

4.5参数设定

4.5.1mandirect subdirect enter program no?enter name? enter一直按Enter进入设置步骤。

4.5.2设置如: 1. 94oC 4 min(预变性)

2. 94oC 30 s (变性)

3. 57oC 30 s(退火)

4. 72oC 1 min(延伸) 2.35

5. 2oC 5 min(延伸)

6. 4oC保存

4.5.3设好后C programor→ B start/stop→ D enter→ D start。

4.5.4结束:B start/stop→ D stop

4.5.5删除程序

mandirect→ subdirect →enter → pregram? Name? → B files→ B delete program → enter → enter。

5.注意事项:

5.1注意本机的使用环境条件和电源,PCR扩增仪室应有除湿设备,定期开机以免仪器损坏。

5.2机盖开关要轻,以防损坏盖锁。

5.3严禁工作时打开盖子。

5.4有故障时请专业知识的维修人员。

6.主要参考文献:PCR扩增仪操作手册

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